| 培養基名稱 | MR-VP肉湯，葡萄糖磷酸鹽肉湯 |
|---|---|
| 英文名稱: |
MR-VP Broth，Glucose Phosphate Broth |
| 培養基類型: | 營養培養基 |
| 產品目錄號: | M248-02 |
| 產品規格: |
500g 其它規格請聯系我們 |
| 保存條件: | 密封，陰涼干燥處保存。制備好的培養基2-8°C避光保存。 |
| 產品性狀: |
麥秸色粉末。 淺琥珀色液體。 |
| 注意事項: | 避免攝入、呼入、皮膚接觸。配制時在通風櫥中進行，戴口罩、手套、護目鏡。 |
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產品描述：
MR-VP肉湯（MR-VP Broth）也稱葡萄糖磷酸鹽肉湯(Glucose Phosphate Broth)用于甲基紅和VP試驗用培養基，用于鑒別產氣大腸桿菌和其它腸道菌。
本產品配方采用《細菌學分析手冊》標準配方1。
MR-VP培養基工作原理
產氣腸桿菌發酵葡萄糖產酸量低，而大腸桿菌發酵葡萄糖產生大量混合酸，能夠克服溶液的pH緩沖系統，使pH降低到4.4以下。在混合酸發酵途徑中，葡萄糖酵解產生三種酸，乙酸、乳酸和丁二酸（琥珀酸）。每發酵1mol葡萄糖產生4mol酸（主要是乳酸和乙酸），和1mol中性產物——乙醇，1mol CO2和1mol H2。
甲基紅試驗中，甲基紅是氫離子指示劑，< pH 4.4 顯紅色；pH 5.0-5.8 橘黃色；> pH 6.0 黃色。用于區分發酵葡萄糖產生大量酸的微生物與產生小量酸的微生物。鑒別葡萄糖磷酸鹽肉湯培養物中痢疾大腸桿菌成員。
VP試驗中，向某些微生物的葡萄糖磷酸鹽肉湯培養物中加入氫氧化鉀，產生紅色熒光。這種顏色反應來自于乙酰甲基木醇氧化產生二乙酰，后者與蛋白胨反應，產生紅色熒光。產氣腸桿菌VP試驗呈陽性，二大腸埃希氏菌VP試驗呈陰性。甲基紅試驗與VP試驗在檢測乳糖發酵型大腸菌群時是負相關關系。
葡萄糖磷酸鹽肉湯培養基的用途：
MR-VP肉湯用于甲基紅試驗和Voges-Proskauer試驗。
葡萄糖磷酸鹽肉湯培養基配方與配制方法
| 培養基成分： | 含量：/L |
|---|---|
| 緩沖性蛋白水 | 7.0 g |
| 葡萄糖 | 5.0 g |
| 磷酸氫二鉀 | 5.0 g |
| 終溶液pH | 6.9± 0.2 |
配制方法：
1. 稱取17.0g本品，加水1L去離子水溶解。
2. 121°C高溫蒸汽滅菌15min。
3. 在鑒別嗜鹽菌時加入2-3%氯化鈉。
實驗方法
甲基紅試驗流程：
1. Prior to inoculation, allow medium to equilibrate to room temperature.
2. By using sterile inoculating loop, inoculate the unknown microorganism taken from an 18-24 hour pure culture into the fresh, sterile medium.
3. Leave the other broth uninoculated (this will be a control).
4. Incubate aerobically at 35-37C for two to five days.
5. Following 24 hours of incubation, aliquot 1ml of the broth to a clean test tube.
6. Reincubate the remaining broth for an additional 24 hours.
7. Following 48 hours of incubation (step 5 above), aliquot 2.5ml of the broth to a clean test tube.
8. Add five drops of methyl red indicator.
9. Observe the medium for the immediate development of a red color.
VP試驗流程：
1. Prior to inoculation, allow medium to equilibrate to room temperature.
2. Using organisms taken from an 18-24 hour pure culture, lightly inoculate the medium.
3. Incubate aerobically at 35ºC. for 24 hours.
4. Following 24 hours of incubation, aliquot 1ml of the broth to a clean test tube.
5. Reincubate the remaining broth for an additional 24 hours.
6. To the aliquot (step 4 above), add 0.6ml of 5% alpha-naphthol. Next add 0.2ml of 40% KOH.
7. Gently shake the tube to expose the medium to atmospheric oxygen.
8. Allow the tube to remain undisturbed for 10-15 minutes.
9. Observe the medium for a pink-red color development. The test may be read for up to, but not beyond , one hour following addition of the reagents.
Note: If test reactions are negative (no red color produced) or questionable, the test can be repeated using the reincubated broth (without reagents) from step 5 above. Reincubation and repeat testing can be performed for up to 5 days.
結果與分析
甲基紅試驗必須在培養至少48h后進行。過早試驗，會造成假陽性。
接種量一定要小，接種量過高，結果無效。
某些微生物能夠合成乙酰甲基甲醇，造成VP試驗假陰性結果。這種假陰性結果一般出現在培養48-72h或更長時間后。這些微生物在瓊脂平板上菌落非常小，約0.5mm，在MR-VP肉湯中生長較差。有些腸桿菌能夠分解乙酰甲基甲醇，VP試驗呈假陰性。
VP陽性的微生物不一定是MR試驗陰性，大腸桿菌（Enterobacter hafnia）和奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）就是例子，這兩種微生物都是MR和VP陽性，雖然VP試驗結果可能延遲。
甲基紅試驗所需培養時間最長為5天，Voges-Proskauer試驗所需培養時間最長達10天。
向培養基中加入VP試劑時，一定要先加1-萘酚，后加KOH。
VP試驗中在加入反應試劑1h后顯紅色，則結果為假陽性。
甲基紅試驗結果如下圖。
VP試驗結果如下圖。
