| 培養基名稱: | TSI培養基，三糖鐵瓊脂，三糖鐵斜面 |
|---|---|
| 英文名稱: |
Triple Sugar Iron Agar Triple Sugar Iron Slant |
| 培養基類型: | 鑒別培養基 |
| 產品目錄號: |
M720-03 |
| 產品規格: | 250g ►查看其它規格 |
| 保存條件: |
避光，密封，陰涼干燥處保存。 |
| 產品性狀: |
淺粉色粉末。 紅色透明至略半透明凝膠。 |
| 注意事項: |
避免攝入、呼入、皮膚接觸。配制時在通風櫥中進行，戴口罩、手套、護目鏡。 |
| 相關產品: |
三糖鐵瓊脂 （1號） 高鹽三糖鐵瓊脂（2.5%氯化鈉） |
產品描述：
三糖鐵瓊脂培養基(Triple Sugar Iron Agar)簡稱TSI培養基，是一種腸桿菌鑒別性固體培養基。 《細菌學鑒定手冊》給出了3種配方，但核心成分及其含量都相同。
本產品采用Medium NO.2配方, 與OXOID配方相同。
TSI培養基的工作原理：
細菌的鑒別歸根結底是根據該種細菌能夠水解、利用那些化合物。TSI培養基的鑒別依據是腸桿菌發酵3種糖類（即葡萄糖、乳糖、蔗糖）的能力和H2S生成能力，或者 說是四種代謝反應：葡萄糖發酵、乳糖和（或）蔗糖發酵、硫化物（這里指硫化鐵）生成、氨基酸氧化脫氨作用。
三糖鐵瓊脂培養基采用的是斜面培養法，即三糖鐵斜面，提供兩種氧氣環境：有氧的培養基表面（斜面，slant）和缺少氧氣的培養基 深處（試管底部，butt）。
葡萄糖發酵產酸量很少，只能影響局部的pH值。培養基中的葡萄糖含量很少，葡萄糖被耗盡后，不能發酵乳糖糖和蔗糖的腸桿菌繼而以 蛋白胨為碳源。氨基酸氧化脫氨產生NH3，使培養基斜面處呈堿性。能夠發酵乳糖和（或）蔗糖的腸桿菌在無氧條件下能夠產大量的酸 ，使整個培養基呈酸性。有的菌種發酵糖類時還產氣（主要為二氧化碳），表現為瓊脂培養基出現斷裂或有氣泡。硫化氫在堿性條件下 與鐵離子生成黑色沉淀——Fe2S3 ，使培養基變黑。但酸性條件下，Fe2S3不穩定，硫化氫則以氣體形式被釋放。因此對于快速產酸的 微生物，H2S生成可能被掩蔽。
酚紅是酸堿指示劑，變色范圍：pH6.6(黃色)~pH8.4(紅色) 。中性條件下顯紅色，當pH>8.4，變成紫紅色。
蔗糖有助于大腸菌的快速檢測，鑒于其發酵蔗糖的速度高于發酵乳糖的速度。另外，某些革蘭氏陰性菌不能夠發酵乳糖，只能發酵蔗糖 。
硫代硫酸根離子為H2S生成反應提供底物。
鐵鹽（硫酸亞鐵或檸檬酸鐵銨）是H2S指示劑，與H2S反應生產黑色沉淀。培養基變黑證明有H2S生成。值得注意的是，對于TSI培養基來 說，這一結論的反向推論是不成立的，即培養基沒有變黑并不能證明沒有H2S生成。原因見上文。
牛肉提取物和酵母提取物為細菌生長提供微量元素和生長因子。氯化維持培養基的滲透壓平衡。
蛋白胨作為主要氮源，也是非發酵型微生物的碳源。對于不能利用乳糖和蔗糖的微生物，當直接碳源葡萄糖耗盡后蛋白胨也作為碳源。
現象與解讀
Triple Sugar Iron Agar培養基的用途：
Triple Sugar Iron Agar是食品藥品監督局（FDA）和美國農業部（USDA）規定的檢測食品中腸桿 菌科微生物用的培養基。
Triple Sugar Iron Agar用于鑒別大腸桿菌、腸桿菌科細菌、假單胞菌、沙門氏菌、志賀氏菌等。
Triple Sugar Iron Agar培養基配方與配制方法
| 培養基成分： | 含量：g/L |
|---|---|
| 胰酪蛋白胨 | 15.0 |
| 動物組織蛋白胨 | 5.0 |
| 酵母提取物 | 3.0 |
| 牛肉提取物 | 3.0 |
| 葡萄糖 | 1.0 |
| 乳糖 | 10.0 |
| 蔗糖 | 10.0 |
| 氯化鈉 | 5.0 |
| 檸檬酸鐵銨 | 0.3 |
| 硫代硫酸鈉 | 0.3 |
| 酚紅 | 0.024 |
| 瓊脂 | 12.0 |
| pH |
7.4± 0.2 |
配制方法：
1. 稱取脫水培養基64.5g，用1L去離子水重懸，浸泡10min。
2. 搖晃混勻，不斷攪拌，煮沸1min使其完全溶解。分裝到16X150mm試管中，液面高度為三分之一試管高度。使用棉塞或可透氣的試管蓋。
3. 121°C高溫蒸汽滅菌15min。不要過度加熱。
4. 在冷卻過程中傾斜放置試管，制備4-5cm長斜面，管底高度2-3cm。
實驗方法
接種方法與注意事項：
1. 將三糖鐵瓊脂制備成較短的斜面，使試管底部至斜面的距離增大，試管口用松散透氣的棉塞塞住，不能堵死管口。以上處理的目的是獲得缺氧與有氧兩種培養環境。
2. 從選擇性培養基上的單菌落中心處挑菌（越靠菌落中心的細胞越年輕），先用接種針穿刺接種到試管底部（必須接種到最底部，否則結果無效），抽出接種針，在斜面上劃線接種。
3. 將接種后的試管置于培養箱中，35-37ºC，有氧，培養18-24h。觀察結果。
結果與分析：
標準菌株在TSI培養基上的生長情況如下：
標準菌株 拉丁名稱 ATCC編號 斜面 管底 產氣 H2S
大腸桿菌 Escherichia coli ATCC8739 A A + -
變形桿菌 Proteus hauseri ATCC13315 A A + +
綠膿桿菌 Pseudomonas aeruginosa ATCC9027 K K - -
腸炎沙門氏菌 Salmonella enteritidis ATCC13076 K K + +
食品中沙門氏菌的分離與鑒別實驗流程
